Untersuchungen zu Shedding

ZUSAMMENFASSUNG

Medizinisches Personal kann mit ungefährlichen Reagenzien, die im Labor verwendet werden, kontaminiert werden. Wir beschreiben molekulare Studien, die an Nasensekreten durchgeführt wurden, die nach und nach von asymptomatischen Labor-Kollegen gesammelt wurden, um festzustellen, ob sie mit dem in der Gemeinschaft zirkulierenden schweren akuten respiratorischen Syndrom Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) oder mit SARS-CoV-2 DNA aus einem Plasmidvektor infiziert waren. Teilnehmer einer prospektiven Studie zur Inzidenz von SARS-CoV-2-Infektionen hatten bei der Anmeldung aseptisch von Studienpersonal Nasenabstriche gesammelt, gefolgt von wöchentlicher Selbstsammlung von vorderen Nasenabstrichen. Die Diagnose von SARS-CoV-2 wurde durch einen Echtzeit-PCR-Test durchgeführt, der auf das Nukleokapsid-Gen abzielt. PCR-Tests, die auf SARS-CoV-2 Nichtstrukturprotein 10 (nsp10), nsp14 und Hüll- sowie drei Regionen des Plasmidvektors abzielen, wurden durchgeführt, um die Amplifikation von SARS-CoV-2 RNA vom DNA-Plasmidvektor zu unterscheiden. Nasenabstriche von vier asymptomatischen Kollegen, bei denen die Echtzeit-PCR-Tests für die SARS-CoV-2-Nukleokapsidziele positiv waren, waren negativ, als sie auf SARS-CoV-2 nsp10, nsp14 und Hüllenprotein getestet wurden. Die aus diesen Nasenabstrichen extrahierten Nukleinsäuren amplifizierten jedoch DNA-Regionen des von den Kollegen verwendeten Plasmidvektors, einschließlich der Ampicillin- und Neomycin/Kanamycin-Resistenzgene, der Promoter-Nukleokapsid-Verbindung und einzigartigen codon-optimierten Regionen. Die Nasenabstriche dieser Personen wurden wiederholt positiv getestet, einschließlich während der Isolation. Die longitudinale Detektion von Plasmid-DNA mit SARS-CoV-2-Nukleokapsid in Nasenabstrichen legt eine Persistenz in Nasalgeweben oder besiedelnden Bakterien nahe. Nichtvirale Plasmidvektoren, obwohl als sichere Laborreagenzien angesehen, können die molekulare Diagnostik beeinträchtigen. Diese Reagenzien sollten unter Verwendung der richtigen persönlichen Schutzausrüstung behandelt werden, um die Kontamination von Proben oder Laborpersonal zu vermeiden.

Bedeutung

Asymptomatische Laborangestellte, die für Tage bis Monate positiv auf SARS-CoV-2 getestet wurden, wurden in ihren Nasensekreten ein Labor-Plasmidvektor gefunden, der SARS-CoV-2-DNA enthielt, mit dem sie in der Vergangenheit gearbeitet hatten. Während frühere Studien die Kontamination von Forschungspersonal mit PCR-Amplicons dokumentiert haben, ist unsere Beobachtung neuartig, da diese Personen das Labor-Plasmid über Tage bis Monate absonderten, einschließlich während der Isolation in ihren Häusern. Dies legt nahe, dass das Plasmid in ihrem Nasengewebe vorhanden war oder dass Bakterien, die das Plasmid enthielten, ihre Nasen besiedelt hatten. Obwohl Plasmide im Allgemeinen sicher sind, zeigt unsere Entdeckung von Plasmid-DNA in den Nasensekreten von Laborangestellten für Wochen nachdem sie aufgehört hatten, mit dem Plasmid zu arbeiten, das Potenzial dieser Reagenzien, klinische Tests zu stören und betont, dass berufliche Expositionen in den vorangegangenen Monaten bei der Interpretation diagnostischer klinischer Tests berücksichtigt werden sollten.